Gestion des prélèvements

• Missions d'un anapath :

  • établir le diagnostic de la maladie
  • pronostic : stade d'évolution de la maladie
  • Théranostique : réponse de la maladie à certains traitements
• On résume le choix du prélèvement à 3 critères :

  • rentabilité du diagnostic
  • accessibilité
  • objectif thérapeutique
• Règles de transmission des prélèvements :

  • prélèvement accompagné d'une fiche de renseignement
  • respect des règles de conditionnement
  • transmission dans les plus brefs délais
• Transmis en moins d'1h :

  à l'état frais qui est obligatoire pour 3 situations : examen extemporané, immunofluorescence, biologie moléculaire
• Transmis en plus d' 1h :

  • fixation au formol 4% tamponné pH 7
  • formol manipulé sous hotte aspirante
  • 10x le volume de la pièce
  • organes coupés ( poumons insufflés ) pour infiltration du formol sinon milieu nécrosé
  • biopsies : fixation en 6-24h
  • grosses pièces : fixation en 24-48h
• Coloration Papanicolaou : cellules épithéliales ( gynécologie ++ )
• Coloration de May-Grünwald Giemsa ( MGG ) : Autre, cellules hématologiques
• étape d'imprégnation du tissus ( on veut le fixer pour le couper et le déposer sur lame de verre ) 3 étapes :

  • déshydratation : eau --> alcool
  • Clarification : alcool --> xylène
  • Imprégnation : xylène --> paraffine
• Coloration standard d'anapathologie pour les cellules du tissu sur lame de verre " coloration HES " :

  • Hématoxyline = noyaux en bleu (basique)
  • Éosine / Phloxine = cytoplasme en rose (acide)
  • Safran = collagène en orange
• coloration Perls : Fer
• coloration Bleu Alcian : Mucine
• coloration de la réticuline
• coloration Bleu Luxol Rapide : Myéline
• coloration Masson-Fontana : Mélanine
• coloration Rouge Congo : substance amyloïde ( révélateur d'une maladie = l'amylose )
• coloration Trichrome de Masson : Collagène
• coloration Ziehl-Neelsen : Mycobactéries ( mise en évidence de germes comme la tuberculose )
• L'immunomarquage : réaction antigène-anticorps dirigé contre une protéine d'intérêt.

  • Anticorps marqué par un chromogène ou un fluorochrome
• On ne peut PAS réaliser l'immunofluorescence sur un tissu fixé au formol ou inclus en paraffine. Donc état frais
• Technique d'hybridation in situ :

  • but = identifié ADN ou ARN
  • CISH = hybridation avec un chromogène
  • FISH = hybridation avec un fluorochrome
• Les techniques de biologie moléculaires ( extraction d' ADN / ARN ) marchent très bien sur les tissus congelés ou fixés au formol et inclus en paraffine.

  Attention, pour certaines pathologie, nécessité d'obtenir un prélèvement à l'état frais : sarcomes, hémopathies, tumeurs pédiatriques.

  sinon on congèle de manière obligatoire
• L' examen extemporané :

  • effectué au cours d'une intervention chirurgicale
  • résultats orientent la suite de l'intervention ( représentativité du matériel , si bégnines ou maline, envahissement…)
  • prélèvement adressé sans délai à l'état frais ( pas de fixateur ou de sérum physiologique !! )
  • résultats rapides --> 10 min
  • ATTENTION : ce n'est pas une réponse définitive. Il faut tout de même privilégier l'examen conventionnel