Méthode de biologie moléculaire

• Les méthodes de biologie moléculaire au laboratoire de génétique sont abordées pendant une semaine et un jour, du 27/11 au 01/12, avec pour professeur Pr FANEN et pour référentiel d'études Inès BOULKROUNE, Célia BEKHADDA et Antonella MOUILA.
• Les outils de biologie moléculaire au laboratoire de génétique comprennent les techniques d'extraction et de purification de l'ADN et de l'ARN.
• La méthode Sanger nécessite la séparation des fragments QCM1 QCM2 QCM3 QCM4 ABCD E.
• Les outils enzymatiques utilisés pour l'étude des acides nucleiques sont également abordés pendant la semaine et le jour.
• La technique de polymerase chain reaction (PCR) est présentée pendant la semaine et le jour.
• La séquence de l'ADN est étudiée par la méthode Sanger pendant la semaine et le jour.
• La notion de haut-débit (NGS) est également abordée pendant la semaine et le jour.
• La qualité des séquences est évaluée par le QCMS d'entraînement pendant la semaine et le jour.
• Le q-PCR est utilisé pour quantifier la quantité d’ARN ou ADN dans un échantillon.
• L’ADN est plus instable que l’ARN.
• La méthode NGS permet de séquencer l’ensemble du génome.
• Il existe différents types d’ARN.
• La détection des nucléotides incorporés par la polymérase est faite directement après chaque cycle d’élongation.
• L’extraction de l’ARNm ne peut pas se faire de manière automatique.
• Les leucocytes sont une source majeure de l’ADN.
• Les protéases et les détergents permettent l’isolation de l’ADN.
• Les fragments migrent sur du gel de polyacrylamide par électrophorèse pour la méthode de Sanger.
• Les polymérases sont des enzymes qui permettent la fabrication d’une chaine ARN/ADN à partir d’une matrice.
• Le NGS est une amélioration numérique et à grande échelle du séquençage Sanger.
• Pour réaliser une RT-PCR, il faut d'abord synthétiser l'ADNc simple brin (RT) puis synthétiser le second brin d'ADNc et la PCR effectués par la Taq polymérase en présence des mêmes composants que pour la PCR où la matrice est l’ADNc.
• On peut séquencer l’ensemble du génome 3.109 pb par la méthode globale ou séquencer en parallèle des fragments ciblés du génome par la méthode ciblée.
• Les technologies NGS ne nécessitent pas de séparation des fragments par électrophorèse.
• La température d’extension est de 70 - 72°C, c'est la température optimale d’activité de la Taq polymérase.
• La phase phénolique surnage au-dessus de la phase aqueuse contenant l’ADN.
• La PCR peut permettre d’étudier également les ARN mais il faudra tout d’abord les transformer en ADNc.
• Dans les deux méthodes, une ADN polymérase copie des molécules modèles en incorporant des déoxynucléotides, c'est-à-dire partiellement (Sanger) ou entièrement (NGS) composé de bases colorées et non extensibles.
• L’ADN est précipité dans l’éthanol et le NaCl.
• Les amorces ne doivent pas se refermer sur elles-mêmes.
• Pour réaliser un PCR de bonne qualité, il faut uniquement s’attarder sur la température.
• La queue poly’A en 3’ est spécifique de l’ARNm.
• De la composition en nucléotides des deux amorces.
• Le RT-PCR est utilisé pour détecter la présence qualitative d’ARN ou d’ADN.
• La méthode de Sanger permet la détermination de la succession de nucléotides composant un fragment d’ADN.
• Si une amorce est riche en A-T, plus la température d’hybridation est faible.
• Les amorces doivent avoir des températures d'hybridation très proches.
• Les produits de PCR servent de matrice pour le séquençage et la quantification de cible.
• La mesure s'effectue au fur et à mesure de la réaction et non pas en point final.
• À chaque cycle d’amplification, la quantité d’ADN mesurée grâce à un marqueur fluorescent dont l’émission est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons produits.
• En laboratoire de génétique, l'étude de l'ARN est nécessaire pour o étudier la conséquence d’une mutation sur l’ARNm o étudier la quantité d’un ARNm (transcrit).
• La qualité et la pureté de l’ADN qui sert de matrice est une étape majeure de la PCR.