Sequenzierung der DNA

• Mithilfe der DNA Sequenzierung kannst du die genaue Reihenfolge der Basen in einem DNA Abschnitt bestimmen
• Der Sanger-Test basiert auf einer Polymerasekettenreaktion (PCR), bei der ein kleiner Abschnitt eines Gens kopiert wird.
• Dei DNA Sequenzierung nach Sanger wird auch Ketten Abbruch Reaktion ( KAR) genannt
• Beispiel Anwendung: frühzeitige Bestimmung von Erbkrankheiten
• Was ist anders im. vgl zumzum normalen PCR? (Nur biologische Gründe)

  Es werden zusätzlich 4 Abbruchnukleotide eingesetzt die im Gegensatz zu den Normalen Nukleotiden einen veränderten Zuckerbaustein haben ( 3tes C-Atom H statt OH) -> Synthese des neuen Stranges stoppt

  • Elektrophogese nach der PCR
• Elektrophogese erklärt

  1. Die entstandenen DNA Stränge werden denaturiert
  2. DNA Fragmente werden (nach den 4 Ansätzen parallel - Nicht modern) ihrer Größe nach getrennt
  3. Ablesung erfolgt ab der Basen Sequenz die am weitesten in Plus Richtung des elektrischen Felds liegt
  4. (Komplementär wird automatisch ergänzt)
• Vorgehen:

  1 Isolation DNA

  2 Vervielfältigung -PCR

  3 Sequenzierung

  4 Elektrophogese