Metodologia

• Materiały do badań

  • Wymazy z błon śluzowych
  • Krew
  • Mocz
  • Płyny wysiękowe
  • Plwocina
• Zazwyczaj gorączka świadczy o zakażeniu bakteryjnym, chyba że pacjent jest w immunosupresji- wtedy nie można wykluczyć zakażenia grzybiczego
• Materiały do badań miejscowe

  • Włosy
  • Paznokcie
  • Zeskrobiny ze skóry
  • Materiał spod płytki paznokcia
  • Wycinki tkankowe i bioptaty
• Materiał pobiera się z najbardziej zewnętrznej części zmiany
• Morfologia mikroskopowa


  Podstawowe narzędzie pracy
• Badania mikroskopowe


  1. Bezpośrednio z materiału pobranego od pacjenta

  2. Pośrednio z otrzymanych hodowli grzybów
• Nawet zobaczenie grzyba nie zwalnia z zakładania hodowli
• Mikrohodowle


  • Pozwalają skrócić czas
• Struktury grzybni wegetatywnej


  • spiralne
  • grzebieniaste
  • rakietowate
  • guzowate
  • "rogi jeleniaˮ
• Elementy rozmnażania wegetatywnego


  • Konidia
  • Artrospory=artrokonidia
  • Blastospory
  • Aleurospory
  • Fialospory
  • Zarodniki sporangialne
• Zarodniki przetrwalne- chlamydiospory powstają w warunkach głodowych, najczęściej u drożdżaków
• Techniki barwienia


  • Gram- grzyby barwią się na fioletowo
  • Barwienie przeżyciowe w błękicie metylenowym
  • Barwienie hematoksyliną i eozyną
• Preparaty "rozjaśnioneˮ


  Z materiałów typowych dla badań mykologicznych
• Skład preparatów "rozjaśnionych"

  • KOH/NaOH
  • DMSO
  • Glicerol
  • H2O
• Preparaty odciskowe


  Wykonywane po uzyskaniu wzrostu z zastosowaniem przezroczystej taśmy klejącej
• Dodatki do podłoża Sabouarda

  • Chloramfenikol/gentamycyna
  • Cykloheksimid
• Podłoże Nicersona zmusza do wytwarzania przetrwalników
• Podłoża komercyjne

  Mycomedium/Mycoline, agary z dodatkiem zestawu barwników chromogennych
• Posiewy

  1. redukcyjny lub rysowy z materiałów wspólnych

  2. Posiew punktowy lub wgłębny specjalną ezą
• Warunki hodowli


  28-30 st, czas: drożdżaki- 48H, pleśniowe- 3-5 dni, dermatofity- 3-6 tygodni
• Inne testy diagnostyczne

  • Auksonogram
  • Zymogramy
  • Testy enzymatyczne
  • Klasyczne testy biochemiczne
  • Testy studzienkowe/paskowe
  • Diagnostyka molekularna
  • Systemy automatyczne
• Test filamentacji

  Ocena zdolności do wytwarzania wypustek przez blastospory drożdżaków- pozwala na odróżnienie C.albicans od innych gatunków
• Test fluorescencji

  Wykrywanie mykoporfiryn- barwników fluorescencyjnych
• Wykrywane metabolity grzybów w płynach ustrojowych

  • Galaktomanann
  • BD-glukan
• Leki przeciwgrzybicze

  • Polieny
  • Azole
  • Fluorocytozyna
  • Kandyny
• Jak działają polieny

  Działają przez wbudowanie się w błonę komórkową, zwiększając przepuszczalność
• Przykłady polieny

  • Nystatyna
  • Natamycyna
  • Amfoterycyna B
• Jak działaja azole?

  Hamują syntezę ergosterolu w błonach
• Przykłady azoli


  • Ketokonazol
  • Flukonazol
  • Itrakonazol
  • Worykonazol
• Fluorocytozyna

  Działa tylko na komórki grzyba, działa na kwasy nukleinowe zaburzając syntezę białek
• Jak dzialają kandyny?

  Zaburzają syntezę BD-glukanu
• Przykłady kandyn

  • Kaspofungina
  • Mikafungina
• Metody oznaczania lekowrażliwości


  • Dyfuzyjno krążkowa
  • E-test