Sesión 2

• Método


  Reacción de Griess en el que el ion nitrito reacciona con una amina aromática (ácido sulfanílico) para formar un compuesto de diazonio, el cual reacciona con una segunda amina aromática (1-naftilamina) para formar un compuesto de tipo azo coloreado
• El compuesto absorbe la radiación visible a 540 nm
• Muestreo


  Botella Niskin
• Recipientes


  Plástico o vidrio
• Disolución patrón de nitrito


  2,00 mM de ion nitrito a partir de nitrito de sodio
• Disolución de ácido sulfanílico


  0,8 g del reactivo disueltos en 100 mL de agua ultrapura
• Disolución de 1-naftilamina


  0,7 g del reactivo disueltos en 100 mL de agua ultrapura
• Ácido acético glacial
• Procedimiento


  1. Preparar disoluciones patrón

  2. Añadir 1 mL de disolución de ácido sulfanílico y 0,5 mL de ácido acético glacial, dejar reaccionar 15 minutos

  3. Añadir 1 mL de disolución de α-naftilamina, dejar reaccionar 5 minutos más

  4. Medir absorbancia a 540 nm
• Método para determinar ion nitrato


  Reducción del ion nitrato a nitrito mediante una columna con granulos de cadmio recubiertos de cobre
• NO3- + Cd(s) + 2H+ ↔ NO2- + Cd2+ + H2O
• Reducción parcial si la reacción es muy alcalina, reducción completa a NO si es muy ácida
• Tampón amónico-amoníaco


  10 g de cloruro amónico disueltos en agua, pH ajustado a 8,5 con amoníaco concentrado
• Procedimiento para determinar nitrato


  1. Lavar gránulos de Cd con HCl 2M

  2. Llenar columna con gránulos de Cd, lavar con CuSO4 y tampón

  3. Pasar muestra y calibrados por la columna a 5-8 mL/min

  4. Recoger los 20 mL siguientes para reacción de Griess
• Método para determinar ion amonio


  Reacción del amoníaco con fenol e hipoclorito en presencia de nitroprusiato
• Reactivo fenol


  80 g de fenol disueltos en 900 mL de etanol/agua, con 600 mg de nitroprusiato disódico
• Reactivo citrato


  240 g de citrato trisódico y 20 g de AEDT-Na2 disueltos en 500 mL de agua, con NaOH
• Reactivo hipoclorito


  Disolución de hipoclorito de sodio 8,47 mM en Cl, diluida en disolución de NaOH 0,1 M
• Procedimiento para determinar amonio


  1. Añadir 2 mL de reactivo fenol, 1 mL de reactivo citrato y 2 mL de reactivo hipoclorito a 50 mL de muestra o patrón

  2. Calentar a 37ºC durante 30 minutos

  3. Enfriar 30 minutos y medir absorbancia a 630 nm
• Intervalo lineal entre 1 y 40 µM de amonio