Sesión 2

• Cromatografía


  Permite separar componentes de características similares en mezclas complejas. La muestra se disuelve por el paso de una fase móvil (gas, líquido, fluido supercrítico) que pasa a través de una fase estacionaria (sólido, líquido) inmiscible con la anterior

  
• Cromatografía


  • Los compuestos que interaccionan con más fuerza con la fase estacionaria se mueven más lentamente y viceversa. De esta manera los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que se pueden analizar cualitativa y cuantitativamente

  
• Calibración


  Variable cualitativa: tiempo de retención tR

  Variable cuantitativa: altura de pico (curva de Gauss), área de pico: normalmente compensa el ensanchamiento de las bandas ap ≈ hp w½
• Cromatografía de gases (GC/GLC)


  El eluente es un gas y permite la separación y determinación de sustancias volátiles, aquellas cuyas temperaturas de ebullición estén comprendidas entre 0 y 300⁰C, y que sean térmicamente estables

  
• Gases usados en GC


  • N2, He, Ar, CO2, H2
• Elución isocrática


  Se mantiene la temperatura del horno de la columna constante durante todo el proceso de separación
• Elución en gradiente


  Se pueden producir aumentos graduales de temperatura que permiten que las sustancias con mayor punto de ebullición se puedan eluir más rápidamente
• Inyección de muestra en GC


  Se emplean microjeringas, las cuales permiten inyectar volúmenes desde unas pocas décimas hasta 20 μL
• Cromatografía líquida de alta eficacia (CLAE-HPLC)


  Permite la separación de todo tipo de compuestos, fundamentalmente orgánicos. Se suele utilizar para separar sustancias no volátiles o termolábiles

  
• Recipientes en HPLC


  • Vidrio, acero inoxidable
• Elución isocrática en HPLC


  Se utiliza un único eluente durante el proceso de separación
• Elución en gradiente en HPLC


  Se modifica la composición de la fase móvil durante el proceso de separación, variando la polaridad, pH, fuerza iónica, etc.
• Sistemas de bombeo en HPLC


  • Trabajar a presiones superiores a 6000 psi, caudales 0,1 – 10,0 mL/min, reproducibilidad: variaciones en el flujo menores a 0,5%, resistentes a la corrosión
• Inyección de muestra en HPLC

  Válvula de 6 vías
• El fitoplancton marino y los macrófitos utilizan las clorofilas y los compuestos carotenoides como receptores de luz primarios y secundarios en fotosíntesis
• Clorofilas


  Tetrapirroles cíclicos que contienen un átomo central de magnesio
• Tipos de clorofilas


  • Clorofila a, clorofila b, clorofila c1, clorofila c2, clorofila d
• Carotenoides


  Pigmentos de polieno isoprenoides, los cuales tienen una gran diversidad estructural, sobre todo en el medio marino
• Carotenoides


  • Fitano, β,β-caroteno, astaxantina, peridinina
• Muestreo


  Toma de muestras con botellas oceanográficas, filtración de la muestra, congelación de los filtros
• Extracción


  Uso de mezclas de acetona, metanol, agua, DMSO, diclorometano, baño de ultrasonidos, centrifugación
• Análisis cromatográfico


  Columnas de reparto de octadecil silano, mezclas de metanol y agua como eluentes, uso de sales de amonio, velocidad de flujo de 1 mL/min
• Detección


  Métodos espectrofotométricos y fluorimétricos, distinción de clorofilas y carotenoides por absorción a 600 nm y 420 nm