imunologické metódy a ich využitie

• na čo slúžia kvalitatívne imunologické metódy?

  dokážeme zistiťprítomnosť a lokalizáciu látok
• napíš princíp ako zistíme prítomnosť látky vo vzorke?


  do vzorky pridáme protilátky (značená) a on sa naviaže na analyzovanú látku, vytvoria komplex látka-protilátka, ktorú môžeme potom vizualizovať
• aké sú kvalitatívne imunologické metódy?

  1. Imunoprecipitácia - protilátka do vzorky, ak je tam dostatok antygénu vytvorí sa komplex pritilátka-antigén = ZRAZENINA/USADENINA (marker)
  2. Imunohistochémia (tkanivá) a 3. Imunocytochémia (bunky) = Pridáme primárnu protilátku (komplex PP-A), pridáme sekundárnu protilátku (SP-ZNAČENKA = viditeľný signál) = komplex PP+A+SP+Z - signál (detekcia voľným okom, mikroskopické techniky)
• Podľa značenky aké máme metódy (cyto a histo)?

  1. FIA - fluorescencia
  2. CIA - chemiluminiscenčná
  3. EIA - enzýmová
  4. MIA - kovová
  5. autorádiografia (rádioizotopy) - rádioaktívne žiarenie (kontakt fotoemulzia)
• Kde môžeme použiť kvalitatívnu imunoanalýzu?

  1. epidemiológia (vírusy, patogény - P)
  2. hematológia (A, AB, B, 0, kontaminácia -P)
  3. medicína (genetické ochorenie -C,P)
  4. gynekológia (tehotenstvo, pohlavie -C,P)
  5. onkológia (nádorové látky -H)
  6. patoanatómia (patogény -H)
  7. súdna (jedy - H,P)
  8. športová (drogy -P)
  9. biotechnológie (transgény)
  10. výroba protilátok a antigénov (prítomnosť -C)
• Kvantitatívne analýzy?


  Prítomnosť, lokalizáciu, počet antigénov

  porovnáva signály vyvolané vzorkou a antigénom = krivka
• Druhy kvantitatívnej imunoanalýzy?

  1. Imunoprecipitácia (Roztok s antigénom dáme do gélu na ktorom je protilátka = komplex A+P = kruhové nerozpustné precipitáty - ich priemer je úmerný koncentrácií antigénu
  2. Imunohisto a cytochémia (priama úmera = intenzita farbenia = % buniek)
• Druhy kvantitatívnej imunoanalýzy


  • Elektroforéza Western imunoblotting
  • EIA, CIA, FIA imunoanalýza
  • RIA rádioimunoanalýza
  • IRMA imunorádiometrická analýza
• Elektroforéza Western imunoblotting


  1. Izolácia antigénu

  2. Prenos frakcií z gélu do membrány

  3. Expozícia membrány s protilátkou (fluorochróm, enzýmom)

  4. Vizualizácia a meranie signálu
• EIA, CIA, FIA imunoanalýza


  Intenzita signálu sa meria v chemiluminiscenčnom, fluorescenčnom, spektrofoto, calori zariadení
• RIA rádioimunoanalýza


  1. Vzorka do skúmavky z antigénom

  2. Antigén označený izotopom

  3. Protilátku proti antigénu

  4. Dva antigény konkurujú o protilátku

  5. Inkubácia zmesi

  6. Precipituje, oddeluje sa

  7. Meriame rádioaktivitu (čím je vyššia, tým viac označeného antigénu máme)
• IRMA imunorádiometrická analýza


  1. Antigén sa vie naviazať na 2 rôzne protilátky

  2. Prvá skúmavka s protilátkou

  3. Pridáme antigén

  4. Pridáme druhú protilátku označenú rádioizotopom, viaže sa na zafixovaný antigén

  5. Meriame radioaktivitu