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• DNA (Desoxyribonukleinsäure)


  DNA-Abschnitte, die oft nicht in ausreichender Menge für Forschung vorhanden sind
• Polymerase Kettenreaktion (PCR)


  1. Mechanismus ähnelt natürlicher DNA-Verdopplung (DNA-Replikation)

  2. Beteiligtes Enzym: DNA-Polymerase

  3. Baut DNA-Stränge auf, indem sie DNA-Bausteine (Nukleotide) aneinanderfügt
• Kettenreaktion


  Produkte eines Reaktionsablaufs werden für nachfolgende Abläufe verwendet
• PCR (Polymerase Kettenreaktion)


  Enzymatische Technik zur schnellen Herstellung von DNA-Kopien eines gewünschten DNA-Abschnitts
• PCR-Schritte


  1. Denaturierung

  2. Primerhybridisierung

  3. Amplifikation
• Im Gegensatz zur natürlichen DNA-Vervielfältigung können bei PCR nur relativ kurze Abschnitte kopiert werden
• DNA-Amplifizierung


  Vervielfältigung eines genau definierten DNA-Abschnitts
• Benötigte Zutaten für PCR

  • Bekannte doppelsträngige DNA-Vorlage
  • Zwei kurze, künstlich hergestellte Primer
  • Viele freie DNA-Bausteine (Nukleotide)
  • Hitzestabile DNA-Polymerasen
  • Pufferlösung
  • Thermocycler
• PCR-Ablauf


  1. Denaturierung

  2. Primerhybridisierung

  3. Amplifikation
• Denaturierung


  Reaktionsgefäß wird auf ca. 90°C erhitzt, um Wasserstoffbrückenbindungen zwischen DNA-Doppelsträngen zu trennen
• Primerhybridisierung


  Reaktionsgemisch wird auf 50-65°C abgekühlt, damit Primer an Vorlagestränge binden können
• Amplifikation (Elongation, Polymerisation)


  1. Temperatur wird erhöht, um optimale Arbeitstemperatur der DNA-Polymerase zu erreichen

  2. DNA-Polymerase lagert passende Nukleotidbausteine an 3'-Ende der Primer an und verknüpft sie
• Ein Zyklus aus Denaturierung, Primerhybridisierung und Amplifikation dauert nur wenige Minuten, um zwei identische Kopien der Ziel-DNA zu erhalten
• Durch wiederholtes Durchlaufen der Zyklen steigt die Anzahl der Kopien exponentiell an