espectroflorimetria

• Fotoluminescência


  Absorvem radiação no UV e emitem na região do visível (fluorescência e fosforescência)

  
• Quimiluminescência


  Reação química produz emissão de luz

  
• Eletroluminescência


  É aplicado uma diferença de potencial e o material emite luz

  
• Bioluminescência


  Acontece produção de luz por via biológica (microorganismos)
• Técnicas de luminescência molecular

  • Fluorescência molecular
  • Fosforescência
  • Quimiluminescência

  
• Em todas estas técnicas, as moléculas de analito são excitadas, obtendo-se um espetro de emissão que fornece informação qualitativa e quantitativa
• Quimiluminescência


  Emissão de radiação por uma espécie excitada formada durante uma reação química
• Fluorescência e fosforescência


  A excitação ocorre por absorção de fotões
• Fotoluminescência


  • Altamente sensíveis; com limites de deteção de 3 ordens de grandeza abaixo da espetroscopia de absorção molecular; intervalos consideráveis de linearidade com a concentração

  
• Quimiluminescência


  Ocorre quando uma reação química produz uma espécie eletronicamente excitada que emite radiação quando regressa ao estado fundamental ou que transfere a sua energia para outra espécie, que depois emite radiação
• Bioluminescência


  Emissão de luz fria e visível por organismos vivos
• Organismos que apresentam bioluminescência

  • Bactérias
  • Fungos
  • Algas
  • Celenterados
  • Moluscos
  • Artrópodes
  • Anelídeos
  • Equinodermas
  • Peixes
• Qualquer célula viva produz quimiluminescência ultrafraca, como subproduto do metabolismo oxidativo, aparentemente sem função biológica
• Bioluminescência


  A emissão de luz é visível, assumindo importantes funções comunicativas intra e interespecíficas, de entre as quais se destacam a atração sexual, defesa, camuflagem e atração de presas

  
• Cor da bioluminescência


  Resulta de rearranjos da molécula de luciferina

  
• Reação química que produz bioluminescência

  1. Presença de enzimas que catalisam a oxigenacao da luciferina

  2. Usando ATP e O2, produzindo oxiluciferina
• Luciferina


  Do latim Lucem farre, "portador de luz" (substratos)
• Luminescência


  Capacidade que os materiais têm de emitir luz a temperaturas mais baixas

  
• Materiais luminescentes


  • Materiais fluorescentes
  • Materiais fosforescentes

  
• Fluorescência


  Os spins dos eletrões não sofrem alteração
• Fosforescência


  Os spins dos eletrões sofrem duas alterações de spin, e por isso este fenómeno é mais lento
• Fluorescência


  Baseia-se na medição da radiação emitida e caraterística de uma substância em solução que é excitada por radiação UV/Vis. A radiação é emitida em todas as direcções e é de igual (ressonância) ou maior da radiação de excitação (igual ou menor energia)
• Fluorescência


  É um fenómeno rápido que não envolve mudança de spin eletrónico ao contrário da fosforescência que é acompanhada por uma alteração de spin, o que faz com que o processo não cesse imediatamente após terminar a irradiação da amostra
• Fluorescência


  Ocorre em 10-5 –10-10 s

  
• Fosforescência


  Ocorre em 10-4 – 10 s (ou mais)
• É raro observar-se fluorescência por absorção de radiação de c.d.o. < 250 nm porque esta é suficientemente energética para causar desativação dos estados excitados por dissociação (quebra da ligação)
• Uma molécula eletrónica e vibracionalmente excitada geralmente vem para o estado eletrónico excitado de mais baixa energia vibracional por processos de relaxação vibracional e conversão interna que não produzem emissão de radiação
• Fluorescência


  Deve-se à transição do nível vibracional mais baixo do estado eletrónico excitado para um nível vibracional do estado eletrónico fundamental
• Eficiência quântica fluorescente (fF)


  É a razão entre o número de moléculas que fluoresce e o número total de moléculas excitadas
• Em análise quantitativa, experimentalmente é necessário fazer diluições de (1:2) da amostra e verificar se IF diminui para metade, garantindo assim que se está a trabalhar numa zona de linearidade da curva de calibração
• Espetro de excitação


  Obtido com uma solução diluída é em geral idêntico ao espetro de absorção
• Espetrofluorímetros


  São de feixe duplo e apresentam um atenuador do feixe ou célula de compensação que é colocado depois do monocromador de excitação para monitorizar a existência de flutuações do feixe de excitação monocromático
• Fonte de emissão: lâmpada de arco de Xe de alta pressão
• Células de sílica fundida (quartzo) com todas as faces transparentes