Anexo 4

• Los reactivos de laboratorio son sustancias que por su capacidad de generar reacciones, sirven en análisis y ensayos químicos
• Los reactivos pueden generar accidentes, por lo que solo deben ser manipulados por expertos y en lugares óptimos
• Significado de los pictogramas en los productos químicos

  • Gas a presión
  • Explosivo
  • Comburente
  • Inflamable
  • Corrosivo
  • Peligro para la salud
  • Toxicidad aguda
  • Peligro grave para la salud
  • Peligro para el medio ambiente
• Residuo Peligroso Biológico Infeccioso (RPBI)


  Contiene bacterias, virus u otros organismos con capacidad de causar infección o toxinas producidas por organismos que causan efectos nocivos a los seres vivos y al medio ambiente
• Tipos de anticoagulantes


  • Anticoagulantes de acción directa
  • Anticoagulantes de acción indirecta
• Principales anticoagulantes utilizados


  • Ácido etilendiaminotertraacético (EDTA)
  • Citrato de Sodio
  • Heparina
• EDTA


  Anticoagulante más empleado para recuentos celulares y estudios morfológicos de células hemáticas
• Fundamento del EDTA


  Actúa como quelante (secuestrante) de Ca++, impidiendo la formación de fibrina
• Heparina


  Anticoagulante utilizado para diversas determinaciones dentro del laboratorio clínico, compuesto por una cadena larga de azúcares con varios grupos sulfato
• EDTA


  Anticoagulante más empleado para los recuentos celulares y estudios morfológicos de células hemáticas
• Formas de EDTA


  • Disódica (aplicado por aspersión en las paredes de los tubos)
  • Tripotásica (líquido)

  
• La forma dipotásica (K2) está recomendada por el Consejo Internacional para la estandarización de la hematología para el conteo de células y determinación de su tamaño
• Fundamento de EDTA


  Actúa como quelante (secuestrante) de Ca++, el cual desempeña un papel muy importante para que se lleve a cabo el proceso de coagulación, impidiendo así la formación de fibra
• Heparina


  Anticoagulante utilizado para diversas determinaciones dentro del laboratorio clínico
• Formas de Heparina


  • Heparina de sodio (aplicado por aspersión en las paredes de los tubos)
  • Heparina de Litio (aplicado por aspersión en las paredes de los tubos)
• Ambas presentaciones de Heparina se pueden utilizar para realizar determinaciones en las cuales se requiere plasma. Por otro lado, la Heparina de Litio también se puede utilizar para procesar muestras de química clínica, electrolitos y amonio
• Fundamentos de la Heparina

  La heparina potencializa la formación de complejos entre la antitrombina III y proteasas de serina: Ixa, IXa y Xia (sustancias que desempeñan un papel muy importante en la formación de coágulo) evitando así la formación del coágulo
• Citrato de Sodio


  La solución de citrato trisódicodihidratado, se utiliza para la obtención de "plasma citratado" el cual es utilizado en pruebas de coagulación sanguínea
• Concentraciones de Citrato de Sodio

  • 3.2%
  • 3.8%
• El citrato de sodio al 3.2% ha sido usado en varios estudios de elaboración de calibradores internacionales de referencia por lo que, a dicho porcentaje, es de utilidad para obtener valores de INR (International Normalized Ratio por sus siglas en inglés) más confiables comparados con los tubos de citrato de sodio 3.8%, ya que estos últimos presentan valores alto de INR en muestras de pacientes que reciben terapia oral de anticoagulantes
• Fundamento del citrato de sodio

  El citrato de sodio se une al calcio (Ca++) presente en la sangre, provocando que desaparezcan los iones de calcio del plasma y evitando así la coagulación sanguínea
• Soluciones amortiguadoras


  Capaces de mantener su pH en valores aproximadamente constantes, aún cuando se agreguen pequeñas cantidades de ácido o base, o se diluya la solución
• Preparación del tampón fosfato 60mM pH=7,5

  1. Pesar 9,08g de KH2PO4 y añadir 1l de agua destilada

  2. Pesar 11,48g de Na2HPO4 y añadir 1l de agua destilada

  3. Tomar 196 ml de KH2PO4 disuelto y mezclar con 804 ml de Na2HPO4 disuelto

  4. Tomar 900,9 ml de la disolución anterior y añadir agua destilada hasta 1000ml
• Colorantes


  Sustancias de origen químico o biológico, generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos, debiendo tener al menos, un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir
• Colorantes naturales


  • Índigo
  • Carmín
  • Orceína y Tornasol
  • Hematoxilina
• Colorantes sintéticos


  Se obtiene de la anilina, o es más exactamente del alquitrán de hulla siendo todos derivados del benceno
• Clasificación de colorantes


  • Colorantes básicos
  • Colorantes ácidos
  • Colorantes neutros
• Reacción física en la coloración

  Fenómeno de absorción similar al que tiene lugar en las materias porosas, considerando que el colorante penetra en los intersticios del cuerpo coloreable y se mantiene allí por la cohesión molecular
• Reacción química en la coloración

  Las células microbianas son ricas en ácidos nucleicos que portan cargas negativas en formas de grupos fosfato combinándose como colorantes básicos cargados positivamente. Los colorantes ácidos que tienen la acción colorante en el anión no tiñen la célula, empleándose como colorante de contraste para colorear su entorno
• Toxicidad de los colorantes

  • Reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador
  • Pueden ser tóxicos para el manipulador, algunos incluso han resultado cancerígenos
  • Algunos solo tienen efecto letal para determinadas especies o géneros bacterianos, siendo utilizados como constituyentes de medios de cultivo selectivo
  • Algunos se emplean como desinfectantes microbianos, más que para teñir, con fines de microscopia
  • Algunos se emplean como indicadores de pH, formando parte de la composición de los medios de cultivo
• Métodos de coloración


  • Tinción simple
  • Tinción compuesta
  • Tinción especial
• Tinción simple


  Se utiliza un solo colorante con el que se tiñe rápidamente el microorganismo, utilizándose fundamentalmente para observar su morfología y tamaño
• Tinción compuesta


  Se utiliza más de una sustancia tintórea. Los colorantes se aplican, a la preparación, separados o juntos, formando parte de una solución. Permite determinar algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de los demás
• Coloración de Gram


  Método de coloración, que es en la actualidad, el más empleado en los laboratorios de bacteriología, mediante el cual, la bacteria sometida a esta tinción, en dependencia de la composición química de la especie, queda teñida de color violeta o de color rojo
• Principios de la coloración de Gram


  A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace más de un siglo, aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción, existiendo controversias al respecto. El criterio más generalizado es que la violeta y el Lugol forman un complejo que reacciona con los componentes bioquímicos de la pared celular deshidratada, fijándose en esta. Teniendo en cuenta que la composición química de la pared no es igual en todos los géneros, la reacción resultante será obviamente diferente, lo que da lugar, que mientras algunos géneros retienen firmemente el colorante al resultar el complejo impenetrable para el decolorante, en otros géneros la barrera que se produce es más permeable, lo que permite al solvente penetrar
• Tinción de Gram


  El más empleado en los laboratorios de bacteriología, mediante el cual, la bacteria sometida a esta tinción, en dependencia de la composición química de la especie, queda teñida de color violeta o de color rojo
• A pesar de que esta técnica de coloración se ha venido empleando desde hace más de un siglo, aún no se ha podido determinar con exactitud la base molecular de la reacción, existiendo controversias al respecto
• Complejo violeta-Lugol


  Se forma y reacciona con los componentes bioquímicos de la pared celular deshidratada, fijándose en esta
• La composición química de la pared no es igual en todos los géneros, la reacción resultante será obviamente diferente
• Tinción de Gram


  1. Colorante primario: Cristal violeta

  2. Mordente: Lugol Iº/KI

  3. Decoloración: Alcohol-Acetona

  4. Colorante de contraste: Safranina