SS6

• Dépôt Sandwich nécessaire pour les analyses de protéines
• MATRICE co-cristallisée avec l’ECHANTILLON : Dépôt solide qui subira l’irradiation du faisceau laser
• Les ions sont extrait de la source a l'analyseur (donc laser non perpendiulaire, inclinaison de 30°)
• Les ions produits sont principalement monochargés (les di-chargés ne sont pas exclus mais moins abondant)
• Les ions sont des especes protonés (en mode positif) ou deprotoné (en mode négatif)
• Bien choisir sa matrice pour avoir recristallisation et un échantillon solide uniforme
• Différence de potentiel de 20 000 V entre la plaque métallique et l'electrode
• La spectrométrie de masse n'est pas quantitative, on ne connais pas les rendement globaux d'ionisation
• Analyseur de masse TOF (Temps de Vol / Time Of Flight) : On tri les ions en fonction de leur temps d'arrivé
• v = distance à parcourir / temps de parcours (t)

  v = d (longueur du tube de vol) / t
• Temps de vol de l’ordre de quelques nanosecondes (10 à 100 10-9 s) (Plus le tube de vol est long plus les temps de vol sont élevés pour mieux les séparer)
• Le temps de vol est proportionnel au rapport massique des molécules
• Les ions les plus légers (m faible) seront les plus rapides (t petit)

  Les ions les plus lourds (m élevé) seront les plus lents (t grand)
• Source MALDI : source discontinue car création d'ion uniquement quand je déclenche le laser
• Le Mode Réflecteur (reflectron) améliore la résolution (les ions font une trajectoire allez-retour)

  De focalisation sur le trajet retour
• Spectrométrie de Masse (MS) = Science et technologie des ions. Méthode de mesure des rapports masse-sur-charge (m/z) de molécules individuelles et ionisées
• Production d'ion en phase gazeuse pour avoir l'échantillon dans tout l'espace
• Au S5 : Analyse de Composés volatils (vaporisables)_phase gazeuse par Technique d’ionisation par Impact Electronique (EI)/Ionisation chimique (CI)
• Au S6 : Analyse Composés non volatils (non vaporisables)_phase condensée par Techniques d’ionisations ambiantes et par désorption
• La désorption est la transformation inverse de la sorption (adsorption ou absorption), par laquelle les molécules absorbées (ou adsorbées) se détachent du substrat.

  Par exemple, la désorption thermique est l'incinération. Le séchage et l'essorage sont également des formes de désorption.
• Le choix de la source d'ionisation ce fait selon caractéristiques/propriétés physico-chimiques de l’échantillon à analyse :

  1. Phase condensée LIQUIDE ou SOLIDE (miscibilité ou solubilité)
  2. Masses moléculaires des composés analysés (petites molécules ou macromolécules
• Le choix de l'analyseur se fait selon la qualité requise des données spectral :

  1. Mesure nominale (nombre entier) -> Basse résolution
  2. Mesure plus précise (valeur à décimales)
  3. Mesure exacte (précision à la 4ème décimale) -> Haute résolution
• Distances égales entre les pics = Massif isotopiques
• Electron Impact EI

  Technique d’ionisation dure

  1. Fragmentations abondantes dans la source
  2. Détection difficile des ions moléculaires
• Ionisation chimique Chemical ionisation CI

  Technique d’ionisation douce

  1. Detection des ions moléculaires
  2. Pas de fragmentation dans la source
• Ionisation par Désorption DI = Particules Incidentes (Atomes ou ions énergétiques ou photons)
• Ionisation ambiante API = Champs électrique et aérosol
• MALDI : Désorption/Ionisation Laser Assistées par une Matrice

  Matrix Assisted Laser Desorption Ionization
• MALDI :

  ETAPE 1 Préparation de l’échantillon : Choix approprié de la matrice (Rapport 1:1000)

  ETAPE 2 Analyse MALDI-MS de l’échantillon : La matrice agit comme un transmetteur d’énergie et de l’agent d’ionisation à la molécule étudiée
• La résolution renseigne la performance de l’analyseur de masse sur ces capacités à :

  • séparer des m/z de valeurs proches

  • mesurer précisément les valeurs de m/z
• MALDI : Acquisition à partir de m/z 500 pour éviter de détecter les ions provenant de la matrice (petite molécule de faible masse molaire)
• Techniques d’ionisation ambiante (API) : Atmospheric Pressure Ionization

  ESI: ElectroSpray Ionization

  APCI: Atmospheric Pressure Chemical Ionization
• Précision de mesure type d’un analyseur à temps de vol (TOF) autour de 2-5 ppm (m/z < 1 000 Da 🡺 R ~ 15 000).
• Tout composé non soluble en condition aqueuse ne pourra pas être analysé avec une source ambiante (API)