micro

• Pour chacun des tests, vous devez

  • Comprendre le principe
  • Connaître la procédure incluant les réactifs utilisés
  • Interpréter les résultats (Identifier la bactérie si possible)
  • Connaître les précautions (faux + ou -, résultats invalides)
• Glucides


  Principale source d'énergie, le glucose est le plus utilisé, grande diversité dans le métabolisme des glucides selon l'espèce bactérienne
• Glucides


  • Glucose, maltose, sucrose, lactose
• Utilité des tests sur les glucides


  Identifier les bactéries selon leurs capacités à dégrader les glucides: chaque espèce bactérienne possède ou non les enzymes nécessaires pour dégrader un ou plusieurs glucides
• Diplocoques Gram -


  • Neisseria gonorrhoeae (glucose+, maltose-, lactose-)
  • Neisseria meningitidis (glucose+, maltose+, lactose-)
  • Neisseria lactamica (glucose+, maltose+, lactose+)
  • Moraxella catarrhalis (glucose-, maltose-, lactose-)
• Bouillon additionné d'un glucide

  1. But: Évaluer la capacité d'une bactérie à dégrader un glucide

  2. Le glucide à l'étude est incorporé à 1%

  3. Les acides organiques formés lors de la dégradation provoquent l'acidification du milieu (pH ↓)

  4. Le milieu contient un indicateur de pH (rouge de phénol, bleu de bromothymol, bromocrésol pourpre)

  5. Un tube de Durham pour détecter la formation de gaz (CO2, H2)
• Réaction positive (bouillon additionné d'un glucide)


  Milieu devient jaune, présence de bulles dans le tube de Durham
• Milieu de Hugh Leifson (OF-glucose)


  1. But: Évaluer la capacité d'une bactérie à dégrader le glucose en aérobiose (par oxydation) ou en anaérobiose (par fermentation)

  2. Le milieu contient 1% de glucose, 0,2% de peptones, bleu de bromothymol comme indicateur de pH

  3. Contrôle de croissance avec un tube sans glucose
• Principe et interprétation du milieu OF

  • Milieu jaune: (+) le glucose est dégradé (acidification)
  • Milieu vert: (-) le glucose n'est pas dégradé (pas de changement)
  • Milieu bleu: (-) dégradation des peptones (alcalinisation) en surface (présence d'O2)
  • Contrôle doit être bleu en surface
• Résultats possibles du milieu OF

  • Réaction d'oxydation visible en présence d'O2 (+) à la surface du tube
  • Réaction de fermentation visible en absence d'O2 (+) dans tout le tube (anaérobiose)
  • Bactérie oxydative non-fermenteur (O+F-)
  • Bactérie fermenteur (O+F+)
• Le tube avec huile n'est pas vraiment utile, au labo ne pas le faire
• Milieu Kligler en pente

  1. Buts: Évaluer la capacité de la bactérie à dégrader le glucose, dégrader le lactose, produire du gaz, produire du H2S

  2. Le milieu contient 0,1% de glucose, 1% de lactose, peptones, indicateur rouge de phénol, citrate ferrique et thiosulfate de Na
• Principe du milieu Kligler

  La bactérie utilise toujours le glucose avant le lactose, or le milieu contient 10 fois moins de glucose que de lactose, donc la bactérie devra utiliser le lactose ou les peptones
• Réactions possibles sur le milieu Kligler

  • Glucose+, Lactose-: acidification du milieu (culot et pente jaunes)
  • Glucose+, Lactose+: acidification du milieu (culot et pente jaunes)
  • Glucose-, Lactose-: alcalinisation de la pente (rose)
  • Glucose+, Lactose-: acidification du glucose, alcalinisation de la pente (peptones)
• Production d'H2S


  Certaines bactéries dégradent le thiosulfate de Na pour produire du H2S, visible par un précipité noir dans le culot
• Production de gaz


  Mise en évidence par des fissures dans le milieu
• Milieu TSI (Triple Sugar Iron Agar)


  1. Similaire au milieu Kligler, avec en plus 1% de sucrose

  2. Interprétation: pente acide (jaune) = dégradation du lactose et/ou du sucrose, des tests supplémentaires sont nécessaires
• Exemple avec le milieu TSI


  • Colonies incolores sur milieu MacConkey, pente jaune sur milieu TSI
• Épreuve Voges-Proskauer (VP)


  1. But: Mettre en évidence la production d'acétoïne suite à la fermentation du glucose

  2. Ajout de 2 réactifs: alpha-naphtol et KOH 40%

  3. Réaction positive = coloration rose à rouge
• Épreuve ONPG


  1. But: Détecter la présence de la β-galactosidase, enzyme permettant de dégrader le lactose

  2. L'ONPG, analogue du lactose, est clivé par la β-galactosidase pour libérer un composé jaune

  3. Interprétation: jaune = ONPG+, incolore = ONPG-
• Interprétation des résultats ONPG et MacConkey


  • ONPG+, MacConkey+ = les 2 enzymes sont présentes
  • ONPG+, MacConkey- = β-galactosidase seule, bactérie lactose lente
  • ONPG-, MacConkey- = aucune enzyme
• Résumé des épreuves sur le lactose et le glucose

  • Lactose: milieux MacConkey, Kligler ou TSI, ONPG
  • Glucose: milieu OF-glucose, Kligler ou TSI, bouillon glucose, épreuve VP
• β-galactoside-perméase


  Enzyme qui permet le transport du lactose dans la cellule bactérienne
• Épreuve ONPG


  1. Interprétation

  2. Jaune → ONPG (+) : présence de la β-galactosidase

  3. Incolore → ONPG (-) : absence de la β-galactosidase
• Résumé: Pour déterminer si une bactérie est lactose lente


  • Faire un MacConkey (LAC+ ou LAC -)
  • Faire le test de l'ONPG
• Épreuve ONPG


  • ONPG
  • MacConkey (Lactose)
  • Enzymes
  • Perméase
  • β-galactosidase
  • Conclusion
• Résumé: Épreuves Lactose et Glucose

  • Lactose
  • Glucose
• FIN DES ÉPREUVES DU MÉTABOLISME DES GLUCIDES !!!
• Étude du métabolisme des protéines et des lipides
• Protéolyse de la gélatine (méthode de Frazier)


  • But: Détecter la gélatinase
  • Cette exoenzyme permet de dégrader la gélatine (une protéine) en acides aminés
• Protéolyse de la gélatine (méthode de Frazier)

  • Ajout du réactif révélateur (HgCl2 et de HCl) autour de la croissance
  • Zone claire autour de la croissance (+): gélatine hydrolysée en acides aminés
  • Zone opaque autour de la croissance (-): gélatine non-hydrolysée
• Structure générale des acides aminés

  Composés de 3 groupements: Groupement amine, Groupement carboxyle, Groupement R variable selon l'acide aminé
• Deux réactions possibles


  • Décarboxylation: perte de CO2 (enzyme agit sur le portion carboxyle)
  • Désamination: perte de NH2 (enzyme agit sur la portion amine)
• Recherche des décarboxylases (LDC, ODC)

  • Principe général: La lysine décarboxylase (LDC) ou l'ornithine décarboxylase (ODC) attaque la portion carboxyle de l'acide aminé
  • Il en résulte la production d'une amine qui est de pH alcalin
• Recherche des décarboxylases (LDC, ODC)

  1. Le milieu (bouillon de Moeller) contient: Glucose, Acide aminé à l'étude (lysine ou ornithine), Bromocrésol pourpre

  2. Cette réaction se fait en anaérobiose: ajouter de l'huile minérale à la surface du tube

  3. Utilisation du glucose provoque l'acidification du milieu (milieu devient jaune)

  4. En présence d'une décarboxylase, l'acide aminé est dégradé et le milieu devient alcalin (milieu redevient violet)
• Recherche des décarboxylases (LDC, ODC)

  • Réaction (+): Violet-pourpre avec croissance (Milieu trouble)
  • Réaction (-): Jaune ou beige pâle (Milieu acide)
• Réaction de désamination

  • Principe général: L'enzyme désaminase attaque la portion amine de l'acide aminé
  • Il en résulte la formation de composés acides
  • La réaction se fait en aérobiose
  • La mise en évidence des produits acides nécessite l'ajout de réactifs
• Phénylalanine désaminase (PDA)

  1. Le milieu contient l'acide aminé à l'étude: Phénylalanine

  2. Phénylalanine -> acide phénylpyruvique

  3. La mise en évidence de l'acide phénylpyruvique se fait par l'ajout de chlorure ferrique: apparition d'une coloration verte
• Tryptophanase (Test de l'indole)

  1. Le milieu contient l'acide aminé à l'étude: Tryptophane

  2. Tryptophane -> indole + ac. pyruvique + ammoniac

  3. La mise en évidence de l'indole se fait par l'ajout du réactif de Kovac/James (Paradiméthylaminobenzaldéhyde): apparition d'une coloration rouge
• Étude du métabolisme des lipides

  • Détection de l'enzyme lécithinase qui dégrade la lécithine
  • Fait sur une gélose à base d'œufs (lécithine)
  • Lécithine -> diglycérides
  • Les diglycérides sont insolubles dans le milieu: ils forment un précipité qui se traduit par une zone de précipitation autour de la strie bactérienne