Intro Praktikum

• Histologi adalah cabang ilmu interdisiplin yang berfokus pada struktur dan fungsi jaringan normal maupun dengan kelainan dari makhluk hidup dengan teknik pewarnaan
• Mikroskop ditemukan pertama kali oleh Anthony Van Leuwenhook
• Mikroskop yang digunakan pada praktikum adalah compound light microscope atau mikroskop biologis
• Mikroskop biologis menggunakan cahayanya sendiri untuk melihat preparat histologi, memiliki 4 lensa dengan perbesaran 40x-1000x
• Lensa okuler adalah lensa yang dekat dengan pengamat
• Revolver merupakan tempat menempelnya lensa objektif
• Lensa objektif adalah lensa yang dekat preparat dan berfungsi untuk memperbesar bayangan benda
• Pengatur fokus makro = pengatur kasar
• Pengatur fokus mikro = pengatur halus
• Papan letak objek digunakan untuk meletakkan slide atau preparat
• Kondensor berfungsi untuk mengumpulkan cahaya dari sumber cahaya menuju preparat

  
• Cara menggunakan mikroskop dengan baik dan benar:

  1. Duduk tegak
  2. Lensa okuler satu sisi dengan meja mikroskop
  3. Atur lensa okuler sesuai dengan jarak mata
  4. Untuk m. binokuler = mata terbuka semua
• Untuk perbesaran maksimal dengan lensa objektif 100x perlu menggunakan minyak emersi yang diteteskan pada permukaan preparat histologi
• Indeks bias minyak emersi = indeks bias kaca preparat
• Perbesaran atau magnifikasi = jumlah atau derajat perbesaran visual dari objek

  
  

  *selain menggunakan magnifikasi dapat juga menggunakan skala
• Lapang pandang = ukuran bidang / perbesaran objektif

  
  

  Semakin tinggi perbesaran semakin sempit bidang pandang mikroskop
• HIstologi berasal dari bahasa Yunani yang mengartikan 'histo' sebagai 'jaring-jaring' atau 'tissue'
• Cara membuat preparat histologi

  1. Fixation
  2. Dehydration -- Clearing
  3. Embedding
  4. Sectioning
  5. Mounting
  6. Staining
  7. Observation
• Fixation bertujuan untuk mempertahankan struktur jaringan ikat dengan menghubungkan protein (cross linking) dan menghambat autolisis

  Prosedur =

  1. Potong kecil spesimen
  2. Untuk L/M masukkan ke formalin
  3. Untuk E/M masukkan ke Glutaraldehyde lalu Osmium tetroxide
  4. Tunggu 24 jam
• Dehydration & clearing bertujuan untuk menghilangkan semua air karena parafin tidak bisa larut air

  Prosedur =

  1. Dehydration = dimasukkan di alkohol di konsentrasi 50-100% setiap 2-3 jam
  2. Clearing = menghilangkan alkohol dan menggantinya dengan zat yang bisa larut di alkohol dan parafin (Xylene solution). Jaringan kecil butuh waktu 1 jam sedangkan yang besar 2-4 jam
• Embedding

  Jaringan ditempatkan ke oven mengandung parafin cair yang 'menyusup' ke slide/blok.

  • Suhu tinggi 52-60^C menguapkan Xylene
  • Blok parafin diperoleh
  • L/M = menggunakan parafin dan resin plastik
  • E/M = menggunakan resin sebagai media embedding

  Keuntungan parafin adalah andal dan mudah dikerjakan

  Kekurangan parafin adalah tidak dapat dipotong tipis
• Sectioning

  • Trimming = pemotongan kelebihan parafin dari blok
  • Sectioning = menggunakan mesin nama microtome yang memotong tipis dalam bentuk pita
  • L/M setebal 5-10μm
  • E/M setebal 0,02-0,1μm
  • Jika terlalu tebal akan tumpang tidih dan menurunkan resolusi
• Mounting & Staining

  • Mounting = pemasangan bagian tipis di atas slide kaca yang didapat dari mikrotom
  • Staining = pewarnaan dengan hematoxylin dan eosin
• Hematoxylin = mewarnai 'komponen asam' sel dan memberi warna biru

  Struktur yang sering diwarnai dengan ini adalah nukleus, retikulum endoplasma kasar, kolagen
• Eosin = pewarna asam, mewarnai 'komponen dasar' sel dengan warna merah muda.

  Struktur yang diwarnai berupa sitoplasma, serat kolagen, mitokondria, lisosom, otot, jaringan ikat, koloid dan sel darah merah