29

• PŘÍSTROJE A TECHNIKY POUŽÍVANÉ KE STANOVENÍ HEMOSTÁZY


  • Krevní obraz: počet a velikost trombocytů
  • Vyšetření cévní stěny
  • Doba krvácení
  • Fragilita kapilár (Rumpel-Leede test)
  • Funkční vyšetření destiček: Trombelastografie, Agregometrie
• Trombelastografie


  Komplexní monitoring hemostázy od vzniku trombu až k jeho rozpadu. Oscialační pohyb kyvety se vzorkem, monitorace pohybu trnu na torzním drátě. Typ výsledné křivky odráží funkci jednotlivých komponent hemostázy.
• Trombelastografie


  • POCT monitoring, vyšetření z plné krve, nevýhodou je, že přístroj neodhalí interferenci.
• Agregometrie


  Zjišťuje schopnost trombocytů vytvářet agregáty. Význam: poruchy funkcí destiček, kontrola antiagregační léčby.
• Agregometrie


  1. Měření rychlosti agregace trombocytů za přítomnosti induktorů (stimulovaná agregace) nebo bez přítomnosti induktorů (samovolná agregace – po adhezi)

  2. Účinkem induktorů dochází v PRP následkem změny napětí na povrchu trombocytů ke změně tvaru a následně k vzájemnému shlukování (reverzibilní agregace)

  3. Po uvolnění sekrečních granul dochází k ireverzibilní agregaci krevních destiček

  4. Sleduje se změna optické hustoty během agregačního děje ve speciálně upraveném nefelometru.
• ADP


  Stimuluje agregaci působením na ADP receptory, i malé koncentrace → reverzibilní agregace (desagregace). Vyšší koncentrace → dojde ke spuštění cyklu ARA (syntéza TXA2) → ireverzibilní agregace. Inhibitory ADP receptoru – clopidogrel (Plavix)
• ARA


  Účinkem cyklooxygenázy transformována na TXA2, cyklooxygenáza je cílový enzym kys. Acetylsalicylové. Nejčastěji používaný antiagregační léky (Aspirin, Anopyrin, Godasal, …)
• Ristocetin


  V přítomnosti komplexu FVIII a vWF změna tvaru a agregace krevních destiček slouží k diagnostice von Willebrandovy choroby.
• APACT 4004


  Optická agregometrie - funkční vyšetření destiček. Optická metoda dle Borna, kde využíváme 4 kanálový agregometr. Vyšetření plazmy s obsahem trombocytů (PRP/PPP + PRP). Měříme rychlost agregace trombocytů za přítomnosti induktorů.

  
• VerifyNow


  Přístroj k monitoraci protidestičkové léčby. Funguje na principu optické agregometrie. Využívá se plná nesrážlivá krev. Induktorem je ARA. Výsledky chodí v tzv ARU (aspirin reaction unit). Pod 550 ARU hodnotíme jako efektivní protidestičkovou léčbu.
• Multiplate


  Impedanční agregometrie - analyzátor funkce krevních destiček v PRP nebo v plné krvi (hirudin – zabraňuje genezi trombinu) = monitorování antiagregační léčby. Měří se změny odporu v důsledku agregace destiček, agregací se mění elektrická vodivost roztoku, což způsobuje změnu elektrické impedance, která se měří.
• PFA 200


  Platelet function analyser - sleduje funkci aktivovaných trombocytů při tvorbě destičkové zátky. Využívá se plná citrátová krev. Měříme tzv. „closure time" = doba do uzavření speciální membránky potažené induktory.
• Agregace trombocytů


  1. Smíchání plné krve s induktorem agregace

  2. Detekce změny elektrického odporu mezi drátky

  3. Hodnocení: plocha pod křivkou (AUC), maximální amplituda agregace (AU), maximální sklon agregace (AU/min)

  4. Sledování změny impedance (odporu) mezi elektrodami v průběhu agregačního děje

  5. Hodnocení antiagregační léčby
• PFA 200


  Platelet function analyser - sleduje funkci aktivovaných trombocytů při tvorbě destičkové zátky
• PFA 200


  1. Využití plné citrátové krve

  2. Měření "closure time" = doba do uzavření speciální membránky potažené induktory

  3. Průchod destiček malým lumenem pokrytým membránou s kolagenem a agonisty agregace (ADP, EPI) -> adheze destiček na membráně -> agregáty destiček uzavřou lumen kapiláry -> zastavení toku krve přes membránu
• Koagulační stanovení fibrinogenu dle Clausse

  1. Ředěná vyšetřovaná plazma je inkubována s nadbytkem trombinu

  2. Koagulační čas potřebný k tvorbě fibrinového vlákna je závislý pouze na koncentraci fibrinogenu

  3. Vyhodnocení: výsledek se odečte z kalibrační křivky v g/L
• Elektromechanické koagulometry


  • Kuličkové koagulometry: ocelová kulička v magnetickém poli, změna frekvence a amplitudy při pohybu kuličky, zpomalení a zastavení pohybu kuličky vzniklou sraženinou
  • Vibrační koagulometry: vibrující plátek s elektromechanickou detekcí, změna frekvence vibrací, tvorba fibrinového vlákna, zvýšení viskozity, zpomalení vibrace kovového plátku
• Optická detekce


  1. Turbidimetrie: měření absorbance po průchodu monochromatického světla kyvetou

  2. Nefelometrie: měření intenzity rozptýleného světla, změna intenzity charakteristickým způsobem, tvorba trombinu, přeměna fibrinogenu na fibrin, vzestup intenzity rozptýleného světla, ustálení hodnoty po vyčerpání fibrinogenu

  
• Elektrická detekce


  • Vznik koagula umožní průchod elektrického impulsu mezi dvěma elektrodami zasunutými do vzorku
• Vizuální detekce


  • Vznik koagula stanovujeme pouhým okem, mícháním zkumavky, vytažení koagula pomocí špejle a změření času
• Spektrofotometrické detekce


  • Stanovení intenzity zbarvení (absorbance), ke kterému dochází v důsledku štěpení specifického chromogenního substrátu, využití chromogenních substrátů, p-nitroanilin, měření při 405 nm, anti-Xa aktivita, monitorace antikoagulační léčby
• Imunochemické metody


  • Aglutinační: antigen v přítomnosti specifické protilátky se shlukuje, latexaglutinace
  • ELISA: specifická interakce antigenu a protilátky, enzym katalyzuje chemickou přeměnu substrátu na barevný produkt, kompetitivní a sendvičová metoda