T8 e T9

• Riscos associados ao trabalho laboratorial em Imunologia

  • Níveis de segurança biológica
  • Métodos de Imunoensaio
• Sistema Imunitário Adaptativo (continução): Síntese e estrutura dos AC

  
• Imunidade Humoral


  • O aparecimento dos AC
  • Factores susceptíveis de influenciar a produção de AC
  • AC do feto e do recém-nascido
  • A SÍNTESE DOS AC À ESCALA CELULAR
• Síntese dos AC


  1. É a mesma célula que fabrica ao mesmo tempo, mas independentemente, as cadeias leves e as cadeias pesadas que constituem a molécula de Ig

  2. Cada célula produtora de AC parece produzir um só tipo de Ig específicas para um mesmo determinante antigénico e de um determinado alótipo

  3. A síntese das Ig faz-se segundo o esquema geral da síntese proteica

  4. No decurso da resposta primária, a mesma célula é capaz de sintetizar primeiro IgM e depois IgG (comutação de classe)

  
• Anticorpos


  Proteínas produzidas como reação a um antigénio
• Estrutura geral das Imunoglobulinas (Ig)


  • Cadeias leves ou cadeias L
  • Cadeias pesadas ou cadeias H
  • Cadeias dissulfito
  • Locais de ligação dos AG (Parátopos)
  • Local de ligação do complemento
  • Local de ligação aos macrófagos

  
• Flexibilidade das Ig


  Os braços do AC são unidos por uma dobradiça flexível: o ângulo entre os braços da molécula de AC varia entre os 0º, nos dímeros de AC, 60º, nas formas triangulares, até 90º, nas formas quadrangulares, demonstrando que as ligações entre os braços são flexíveis
• Classes de Imunoglobulinas


  • IgG
  • IgM
  • IgD
  • IgA
  • IgE
• IgG


  • Representa 70-75% das Ig do organismo (a mais abundante)
  • É uma Ig monomérica simples de 146 Kdaltons (Kd)
  • Tempo de semi-vida ≈ 1 a 3 semanas
  • Possuem cadeias pesadas tipo g (g1, g2, g3, g4) o que permitiu a criação de 4 subclasses
• IgM


  • Representa aproximadamente 10% do conjunto de Ig
  • Apresenta geralmente uma estrutura pentamérica
  • As cadeias pesadas individuais têm um PM de ≈ 65 Kd e a molécula completa tem PM de 970 Kd
  • As 5 cadeias são ligadas entre si por pontes dissulfito entre os domínios Cμ3 e por uma cadeia polipeptídica inferior chamada de cadeia J
  • Activadora importante do complemento pela via Clássica

  
• IgA


  • Representa 15-20% das Ig do soro humano / Tempo semi-vida ≈ 4-7 dias
  • No Homem, mais de 80% da IgA ocorre sob a forma monomérica e está presente no sangue nesta forma, mas na maioria dos mamíferos, a IgA apresenta-se principalmente na forma polimérica
  • É a Ig predominante em secreções onde se designa por IgA secretada (s-IgA) e se apresenta na forma dimérica: saliva, lágrimas, leite materno, mucosas do trato gastrointestinal, trato respiratório e genito-urinário
  • Apresenta 2 subclasses: IgA1 e IgA2

  
• 1. IgA


  • É composta por: 2 unidades de IgA ligadas entre si na sua porção FC por uma cadeia J (PM 15 KDa)
  • um componente secretor (PM 70 KDa)
  • O componente secretor ligado facilita o transporte da s-IgA para as secreções e protege a molécula da ação proteolítica das enzimas hidrolíticas (destrutivas)
  • A cadeia J é sintetizada pelos plasmócitos / O componente secretor é sintetizado por células epiteliais

  
• IgD


  • Está presente no soro em baixas concentrações, representando menos de 1% do total de Igs plasmáticas
  • Tempo de semi-vida ≈ 2-8 dias
  • É expressa em todos os linfócitos B naïve, desempenhando no contexto do BCR uma função de ativação mais eficiente do que a IgM
  • É mais susceptível à proteólise do que a IgG1, IgG2, IgA ou IgM
  • Tem tendência para sofrer proteólise espontânea
  • Possui uma grande quantidade de carbo-hidratos distribuída por várias unidades
• IgE


  • Está presente no soro em baixas concentrações
  • Tempo de semi-vida ≈ 1-5 dias
  • É produzida principalmente por plasmócitos dos pulmões e da pele
  • É encontrada na membrana de superfície de basófilos e mastócitos em todos os indivíduos
  • O PM maior da cadeia ε (72,5 Kdaltons) pode ser explicado pela presença de maior nº de resíduos de aa (≈ 550) distribuídos pelos cinco domínios (VH, Cε1, Cε2, Cε3 e Cε4)
  • Pode ser clivada por enzimas, originando os fragmentos F(ab')2, Fc e Fc'
• Mecanismos da diversidade dos AC

  • Múltiplos genes da região V na linhagem germinativa
  • Mutações somáticas do gene V durante a formação das células B
  • Recombinação somática entre elementos formadores de um gene da região V
  • Conversão génica
  • Adição de nucleotidos

  
• Teoria das cadeias laterais de Ehrlich
• Teoria da linhagem germinativa
• Teoria da diversificação somática
• Teoria das cadeias laterais de Ehrlich


  Ehrlich no início do século XX, propôs que a combinação do AG com um recetor pré-formado nas células B (hoje conhecido como AC) induziria a célula a produzir e formar mais recetores
• Teoria da linhagem germinativa

  Dreyer e Bennett defendiam que os fragmentos variáveis e constantes das cadeias eram codificadas por genes distintos. Assim, esta teoria apenas explicava as múltiplas regiões variáveis

  
• Teoria da diversificação somática

  Um nº limitado de sequências da região V herdadas sofreria mutações nas células B ao longo da vida de um indivíduo, gerando uma grande diversidade de AC

  
• Mecanismos da diversidade dos AC

  • Múltiplos genes da região V na linhagem germinativa
  • Mutações somáticas do gene V durante a formação das células B
  • Recombinação somática entre elementos formadores de um gene da região V
  • Conversão génica
  • Adição de nucleotidos

  
• Variabilidade na estrutura das Ig

  • Variação Isotípica
  • Variação Alotípica
  • Variação Idiotípica
• Diferenças Isotípicas


  Diferenças entre as regiões constantes devido ao uso de genes diferentes de região C
• Diferenças Alotípicas


  Diferenças devido a diferentes alelos do mesmo gene C
• Diferenças Idiotípicas


  Diferenças devido a rearranjos particulares dos genes VH e VL
• Sequências hipervariáveis no local de ligação do AG


  Permitem a ligação dos AC a uma série de AG diferentes
• Regiões Hipervariáveis (Regiões Determinantes da Complementariedade- CDR)

  Pequenos segmentos de polipéptidos com grande variabilidade que se encontram no interior das regiões variáveis de ambas as cadeias, leves e pesadas. Localizam-se próximo aos aa nas posições 30, 50 e 95. Como formam o sítio de ligação do AG, podem ser referidas como CDR
• Ig SECRETADAS e Ig DA MEMBRANA

  • IgM TRANSMEMBRANAR
  • IgM SECRETADA

  
• Produção de Anticorpos


  1. ADN rearranjado

  2. Transcrição

  3. 1ª transcrição do ARN

  4. Clivagem e processamento mARN

  5. Tradução, processamento proteíco

  
• Funções dos Anticorpos


  • Fagocitose
  • Citoxicidade celular dependente de AC
  • Libertação de mediadores
  • Favorecimento da apresentação do AG

  
• Receptores Fc


  Recetores que se ligam à porção Fc – aos domínios C2 e C3 da cadeia pesada das Ig
• Receptores de superfície celular para IgG

  • FcγRI (CD64)
  • FcγRII (CD32)
  • FcγRIII (CD16)

  
• FcγRI (CD64)


  Liga-se à IgG monomérica com grande afinidade. Encontra-se primariamente expresso em todas as células da linhagem fagocítica mononuclear. Está envolvido na fagocitose dos complexos imunes

  
• FcγRII (CD32)


  Liga-se exclusivamente à IgG com baixa afinidade. Nas células B, possui a função de moderar a ativação celular qdo os níveis de AC específicos se encontram elevados
• FcγRIII (CD16)


  Expresso nos macrófagos, células NK, algumas células T e interage com a IgG. Pode associar-se com dímeros de cadeias γ ou com dímeros de cadeias ζ do complexo TCR ou com heterodímeros γ - ζ

  
• Receptores das IgG nos fagócitos

  • Expresso pelos monócitos
  • Expresso pelos monócitos e neutrófilos
  • Expresso pelos monócitos e ancorado como proteína transmembranar normal
• Receptores de superfície celular para IgE

  • FcεRI
  • FcεRII
• FcεRI


  Receptor de alta afinidade para a IgE, encontrado nos mastócitos e basófilos. Possui uma estrutura tetramérica formada por 1 cadeia α, 1 cadeia β e 2 cadeias γ

  
• FcεRII ou CD23


  Receptor de baixa afinidade para a IgE, encontrado nos leucócitos. Existem 2 formas - FcεRIIa expresso nas células B e FcεRIIb cuja expressão pode ser induzida em células T, B, monócitos e eosinófilos pela citocina IL-4